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使用二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)HCC827細(xì)胞

更新時(shí)間:2021-06-02  |  點(diǎn)擊率:1122

       注意事項(xiàng)

       凍存細(xì)胞接收后的處理:

       1.干冰運(yùn)輸,收到細(xì)胞后立即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱短暫中轉(zhuǎn)或直接復(fù)蘇;
       2.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)*揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請(qǐng)立即拍照后與我們聯(lián)系。
 

       復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理:

       1.收到細(xì)胞后,請(qǐng)首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液,培養(yǎng)液是否混濁,如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請(qǐng)立即拍照把圖片發(fā)給我們。
 

       2.75%酒精消毒瓶身后放二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置4-6h后,在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片,若有貼壁細(xì)胞脫落,可收集上清離心,將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。
 

       3.建議收到當(dāng)天不要消化處理,如果細(xì)胞長(zhǎng)滿90%,可選擇傳代處理。
 

       4.如您收到細(xì)胞3天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題,出現(xiàn)的細(xì)胞問題將不提供免費(fèi)重發(fā)服務(wù)。
 

       細(xì)胞培養(yǎng)方法:

       1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
       ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
       ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
       ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回
二氧化碳培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
       ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
       ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
       ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
       

       2、細(xì)胞復(fù)蘇:
       ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
       ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

 

       3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
       ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
       ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
       ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
       ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

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