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普通培養(yǎng)箱改為CO2培養(yǎng)箱及在雜交瘤中的應(yīng)用

更新時間:2021-05-28  |  點擊率:1148

       材料與方法

       將三角形橡膠密封條和醫(yī)用乳膠管用市售強力膠封閉內(nèi)箱接縫處及玻璃內(nèi)門:除去箱頂溫度計,箱內(nèi)掛入干濕溫度計(可在玻璃內(nèi)門處觀察溫、濕度):原溫度計孔以橡膠塞密封后打孔安裝二氧化碳培養(yǎng)箱入氣管和排氣管,連接CO2鋼瓶與CO2入氣管,排氣管用鐵夾夾閉;

 

       普通氧氣流量表控制CO2流量,濕化瓶內(nèi)盛10硫酸銅水溶液(可抑制霉菌生長);內(nèi)箱底層置一方盤盛水(可保持箱內(nèi)相對濕度在70以上)。測量內(nèi)箱長、寬、高,計算容積為600m3,開放排氣管,調(diào)節(jié)CO2流量在10升:分,持續(xù)3分鐘,進氣30升。此時箱內(nèi)CO2理論含量應(yīng)為50,夾閉排氣管。

 

       我們用CO2檢測管測得CO2實際含量為5±0.20.24小時后CO2含量下降約0.50,左右,可用CO2持續(xù)微量補充(以20個氣泡分計)來衡定控制溫度在370.5℃

 

       使用注意

       1.環(huán)境盡量保持清潔二氧化碳培養(yǎng)箱定期熏蒸消毒,及時更換濕化瓶內(nèi)的硫酸銅溶液,以防止霉菌生長和支原體污染。

 

       2.平時短、頻繁地開啟可不必補充CO2,使用完畢后按要求及時重新調(diào)整CO2含量。

 

       3.由于該二氧化碳培養(yǎng)箱外門無電熱裝置,導(dǎo)致玻璃門內(nèi)外溫差而出現(xiàn)的冷凝水,一般無不良影響。有條件者可在外門夾層加電熱絲解決。

 

       4.因箱內(nèi)無氣體循環(huán)系統(tǒng),CO2與空氣混勻度未必一致,但實驗結(jié)果證明并無影響。
討論我們應(yīng)用該
二氧化碳培養(yǎng)箱進行載脂蛋白B100單克隆抗體(apo100cab)雜交瘤細胞系的建株實驗,獲得成功。培養(yǎng)的小鼠SP20-Ag14骨髓瘤細胞系及小鼠脾細胞、腹腔巨噬細胞、雜交瘤細胞等均生長良好,平均融合率為666克隆化培養(yǎng)后所獲的3株apoB0 ) McAb雜交瘤細胞系誘生的腹水中McAb效價均為1:3200( ELISA):細胞株經(jīng)液氮保存、傳代與凍融一年多,仍能持續(xù)穩(wěn)定地分泌高滴度的McAb實踐證明,這一裝置性能穩(wěn)定,使用方便,經(jīng)濟可靠,并可根據(jù)需要調(diào)整CO依度,可*替代昂貴的自動CO2孵箱,對普通實驗室及基層單位進行細胞培養(yǎng)和制備單充隆抗體具有廣泛的推廣價值。

 

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