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花生四烯酸檢測的操作步驟

更新時間:2019-03-18  |  點擊率:3936

接下來喆圖小編就來給大家說說檢測需要提供的試劑和器材:

1、37℃恒溫培養(yǎng)箱

2、 酶標儀

3、 移液器及一次性吸頭

4、 蒸餾水

5、 一次性試管

6、 吸水紙

1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL,空白對照孔不加。

4、在37℃水浴鍋中溫育30min。

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次。

6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。

7、溫育:在37℃水浴鍋中溫育30min。

8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min。

10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

12、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。MAX終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

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